人促胰島生長素(betatrophin)elisa試劑盒

　　本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

　　本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人促胰島生長素(betatrophin)的含量。

　　有效期：6個月

　　保存條件：2-8℃

　　試劑盒組成：

　　備注：

　　1.(96T/48T)打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。

　　2.標準品濃度依次為：800、400、200、100、50、25 ng/L

　　3.經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用ye將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

　　檢測前準備工作：

　　1.請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

　　2.從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正?，F(xiàn)象;放置室溫，輕搖均勻，待結晶溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

　　3.20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

　　實驗原理：

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人胰島生長素(betatrophin)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰島生長素(betatrophin)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。

　　實驗所需自備試驗器材：

　　1.酶標儀(450nm)

　　2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒溫箱

　　4.蒸餾水或去離子水

　　人促胰島生長素(betatrophin)ELISA試劑盒樣本處理及要求：

　　1.血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　3.組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果)，稱重后將組織jian碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

　　4.細胞培養(yǎng)物上清：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

　　5.其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

　　6.樣品外觀：樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。

　　7.樣品保存：樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃(6個月內(nèi)檢測)，避免反復凍融，標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

　　注意事項：

　　1.嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

　　2.洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

　　3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

　　4.底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

　　5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

　　6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。

　　7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

　　8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

　　9.不能使用過期產(chǎn)品。

　　10.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

　　操作步驟：

　　1.從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。

　　3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

　　4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

　　實驗結果計算：

　　繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

　　人促胰島生長素(betatrophin)ELISA試劑盒性能：

　　1.檢測范圍：25 ng/L – 800 ng/L。

　　2.靈敏度：檢測濃度小于1.0 ng/L。

　　3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

　　4.重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

　　技術小提示：

　　1.當混合或重溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。

　　2.為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。

　　3.每次孵育時，請正確使用封板膠可保證結果的準確性。

　　4.混合后的顯色底物在上板前應為無色，請避光保存;假如微孔板后，將由物色變成不同深度的藍色。

　　5.終止液上板順序應同顯色底物上板順序一致;加入終止液后，孔內(nèi)顏色由藍變黃;若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻;請充分混合。

　　人促胰島生長素(betatrophin)elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。