對(duì)于血清知識(shí)點(diǎn)，圍觀的看過來!

　　由于血清來源于動(dòng)物，且含有細(xì)胞培養(yǎng)中所需要的各種營養(yǎng)(血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等)，這奠定了血清是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中的試劑的基礎(chǔ)。

　　目前血清的采集地主要分布在以下國家：

　　市面上的牛血清產(chǎn)品名稱雖然對(duì)較多，但根據(jù)其不同的特性，大致可以分為以下四種。根據(jù)牛的取血年齡可以區(qū)分：

　　胎牛血清

　　胎牛血清(Foetal Bovine Serum，簡稱FBS)指的是取自未出生，母牛剖腹心臟穿刺采血得來的血清。

　　國產(chǎn)胎牛血清

　　國產(chǎn)胎牛血清(并無明確定義，但通常用此命名)指的是出生4-6小時(shí)，且未進(jìn)行哺乳(unsuckled)進(jìn)食的新生牛，有時(shí)還稱作國產(chǎn)新生牛血清。

　　新生牛血清

　　新生牛血清(Newborn Calf Serum，簡稱NBCS，或稱小牛血清)指的是出生14天-3個(gè)月進(jìn)行取血的牛血清。

　　成年牛血清

　　成年牛血清(Adult Bovine Serum，簡稱ABS)指的是取血時(shí)牛齡通常超過12個(gè)月的牛血清。

　　以上取血牛齡的差異主要是受當(dāng)?shù)貒倚竽翗I(yè)的發(fā)展及法規(guī)限制影響，因?yàn)榕Ｑ酁樾竽翗I(yè)副產(chǎn)業(yè)，并未有專門為取血而養(yǎng)的牛。

　　幾種血清的比較：

　　這幾種不同牛齡血清所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同。常規(guī)來說，年齡越小的牛血清，細(xì)胞培養(yǎng)效果越好。

　　胎牛血清培養(yǎng)效果好于新生牛，且因?yàn)樘ヅＮ催M(jìn)食過母乳，所以IgG含量低。故目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)人員選擇的都是胎牛血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

　　胎牛血清成分已知的有上千多種，以下為主要成分表：

　　以下是BUNSEN本生技術(shù)小編為您總結(jié)的血清相關(guān)的知識(shí)點(diǎn)：

　　1、血清的顏色如何?

　　為何有的胎牛血清顏色偏紅，而有的偏黃?是因?yàn)樘ヅＱ孱伾怯裳t蛋白(鮮紅)和膽紅素(黃)決定的，主要是受血紅蛋白影響。

　　血紅蛋白含量很低時(shí)，含少量膽紅素，呈淡黃或金黃。血紅蛋白含量高時(shí)，會(huì)呈現(xiàn)淡紅色。

　　需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃冰箱(未開封血清有效期為5年)。若存放于4℃，請(qǐng)勿超過1個(gè)月，若一次無法用完一瓶，建議將血清無菌分裝并冷凍。

　　2、血清如何解凍?

　　血清解凍需采用逐步解凍法：將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天，然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷

　　輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍，這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)并出現(xiàn)沉淀。

　　3、使用前是否需要過濾?

　　本公司血清在ISO 13485認(rèn)證的廠房中生產(chǎn)，經(jīng)過3次0.1 μm過濾，出廠經(jīng)過檢測(cè)并且會(huì)使用三種以上的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)測(cè)試及無菌檢測(cè)，污染幾率非常非常非常低(重要的事情說三遍)。通常細(xì)胞污染有非常多的可能性，根據(jù)協(xié)助使用者進(jìn)行分析檢測(cè)，結(jié)果表明絕大部分都是因人為操作失誤導(dǎo)致污染。因此買來的血清不需要再次進(jìn)行過濾。

　　4、為什么血清中會(huì)有沉淀生成，主要成分是什么，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)有什么影響?

　　血清中沉淀主要有：纖維蛋白(絮狀沉淀)，胎球蛋白，脂蛋白，冷凝集素，玻連蛋白，磷酸鈣(顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀)，膽固醇等。

　　原因：造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活，反復(fù)凍融，長期儲(chǔ)存于2-8℃或者室溫。

　　預(yù)防：非必要，不用熱滅活;避免反復(fù)凍融;-20℃保存;4℃全融(期間間斷搖晃均勻);2000 rpm離心5分鐘(不建議用0.2 μm濾膜過濾)，取上清使用。

　　5、黑膠蟲是來源于血清嗎?

　　目前科學(xué)界對(duì)黑膠蟲的身份并無定論, 通常是顯微鏡下觀察到密密麻麻的小黑點(diǎn)在培養(yǎng)基中自主游動(dòng)，就稱為黑膠蟲污染。

　　黑膠蟲在鏡下的典型特征呈卵圓狀、球狀、桿狀等，可引起細(xì)胞生長遲緩或裂解凋亡。

　　目前沒有充分的數(shù)據(jù)表明黑膠蟲來源于血清，因?yàn)槠涑叽邕h(yuǎn)大于血清過濾時(shí)所用的0.1微米(μm)濾膜。建議各位老師通過使用三抗(Cat#: C3422-0100)外加支原體處理試劑(Cat#: 03-038-1B)嘗試殺滅黑膠蟲。

　　6、血清存在批間差嗎?

　　答案是毋庸置疑的，因?yàn)檠鍋碓从趧?dòng)物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)

　　條件不同而異。每個(gè)批號(hào)的組分和百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。

　　建議先進(jìn)行批號(hào)測(cè)試，篩選出合適批號(hào)，購買半年甚至一年以上的用量，避免批間差造成實(shí)驗(yàn)波動(dòng)(胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年)。

　　Tips：

　　1、如果要除去血清中的沉淀，可以將血清分裝至無菌離心管中，400g 離心，留上清即可。由于濾膜容易被沉淀堵塞，因此不建議用過濾的方法。

　　2、沉淀不是檢驗(yàn)血清的硬指標(biāo)，但為了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)美觀、實(shí)驗(yàn)便利，還是應(yīng)該盡量減少沉淀的產(chǎn)生。掌握正確的血清解凍、使用方法，再加上一款品質(zhì)穩(wěn)定的優(yōu)秀血清，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)來說，至關(guān)重要。

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